Détection d'agents pathogènes par biréfringence

Des chercheurs de l'ETH menés par Raffaele Mezzenga ont mis au point une nouvelle méthode de diagnostic. Celui-ci repose sur la biréfringence de la lumière et sur des substances porteuses de lipides spéciales. Gr?ce à ce procédé, les médecins du monde entier pourraient détecter facilement, rapidement et de manière fiable la malaria, le virus Ebola ou encore le VIH.

Vue agrandie : le chercheur Jijo Vallooran mesure l'intensité lumineuse.
Le chercheur Jijo Vallooran mesure l'intensité lumineuse d'un échantillon à l'aide d'un simple posemètre et d'une application sur son smartphone. (Image : Laboratoire Prof. R. Mezzenga / ETH Zurich)

Rien de plus simple en apparence : on dépose une goutte de sang sur une lame et on attend quelques minutes. Ensuite, on place la lame dans un appareil, entre deux filtres de polarisation de la lumière disposés en croix. Si l'échantillon contient de minuscules cristaux qui biréfringencent la lumière, celle-ci s'échappe de l'appareil.

C'est exactement ce qui se passe lorsqu'une personne est atteinte de paludisme : l'échantillon produit un schéma de biréfringence, de sorte qu'il est possible de détecter rapidement et facilement cet agent pathogène à l'aide de ce simple schéma "oui" ou "non". Il est également possible de mesurer l'intensité lumineuse, et donc la quantité de l'agent pathogène recherché, à l'aide d'un posemètre disponible dans le commerce, branché sur un smartphone et commandé par une application.

Développement d'un test rapide bon marché

Ce qui ressemble presque à de la science-fiction vient de devenir réalité. Le groupe de recherche de Raffaele Mezzenga, professeur de denrées alimentaires et de matériaux souples, a récemment publié un travail scientifique dans lequel il présente ce nouveau test rapide. Ce test permet non seulement de détecter les agents pathogènes du paludisme, mais aussi des virus comme le VIH ou le virus Ebola, diverses bactéries ou des biomarqueurs comme le glucose ou le cholestérol.

Cette méthode de détection n'est pas seulement extrêmement rapide, elle est également très bon marché par rapport aux autres méthodes de détection. L'appareil de polarisation co?te tout juste 20 francs, explique Jijo Vallooran, premier auteur de la publication qui vient de para?tre dans la revue spécialisée "Advanced Functional Materials".

Exploiter la biréfringence

Aussi général que soit le concept derrière cette nouvelle technologie et aussi simple que puisse para?tre son utilisation, la base scientifique sur laquelle repose l'invention des chercheurs de l'ETH est complexe.

Pour leur procédé, les scientifiques utilisent ce que l'on appelle des cristaux liquides lyotropes, qui sont constitués de structures auto-organisées de molécules de graisse dans l'eau. Le groupe de recherche de Raffaele Mezzenga travaille déjà depuis longtemps avec de tels cristaux liquides. Les scientifiques les utilisent également pour d'autres applications, comme l'administration de substances actives ou la cristallisation de protéines.

Les cristaux liquides lyotropes s'organisent en réseaux spéciaux avec une symétrie unique. Cela signifie que le motif de base cubique du cristal liquide se répète périodiquement. Dans le cas des phases de cristaux liquides tridimensionnels, des nanocanaux se forment à partir de doubles membranes lipidiques. Leur diamètre est de quelques nanomètres, de sorte que seules quelques molécules d'eau libres sont disponibles dans le cristal liquide. La majorité d'entre elles sont liées aux parois des canaux. Les cristaux liquides sont isotropes et ne présentent donc pas de propriétés de biréfringence de la lumière. Observés entre deux filtres polarisants disposés en croix, ils apparaissent noirs.

Des réactions enzymatiques génèrent un signal

Vue agrandie : modèles de réfraction de la lumière
Schéma de réfraction de la lumière d'un échantillon positif au virus Ebola. (Image : ETH Zurich/Jijo Vallooran)

Pour produire la biréfringence et donc un signal, les chercheurs ont encore une fois eu recours à une astuce : Ils ajoutent certaines enzymes aux cristaux liquides afin que des réactions chimiques puissent se produire dans les nanotubes. Comme il n'y a que très peu d'eau disponible dans les tubes, les produits des réactions sont précipités sous forme de cristaux. Ceux-ci possèdent la propriété de biréfringence de la lumière.

Si l'on observe maintenant l'échantillon à travers les filtres à polarisation croisée, on distingue des motifs lumineux colorés pour le cas où l'enzyme a réagi avec la substance à tester. "Ce motif de biréfringence est le seul signal que nous devons utiliser pour les diagnostics et les analyses", explique Mezzenga.

Approche progressive de la détection du paludisme

Au début de leur recherche, les scientifiques ont testé leur système avec des composés chimiques pouvant être transformés par voie enzymatique. Ils ont ensuite affiné leur méthode et l'ont adaptée à des substances médicalement importantes comme le glucose ou le cholestérol. Par la suite, ils ont élargi le champ des tests possibles aux bactéries et aux virus, en commen?ant par le VIH.

Enfin, Mezzenga, Vallooran et leurs collègues ont pu démontrer que leur méthode pouvait également être adaptée au diagnostic de la malaria, causée par des plasmodies. "Les plasmodiums pénètrent dans les globules rouges et consomment l'hémoglobine, le pigment rouge du sang. La partie hème, qui est toxique pour les parasites, se cristallise et possède naturellement des surfaces biréfringentes. Ainsi, nous n'avons pas besoin de marquer le parasite avec des anticorps ni d'une réaction enzymatique pour obtenir un signal lumineux", explique Mezzenga.

Les virus ou les bactéries, en revanche, doivent d'abord être rendus visibles et chimiquement actifs à l'aide d'anticorps spécifiques avec des enzymes qui leur sont liés, avant de pouvoir être détectés par la biréfringence de la lumière.

Flexible, bon marché, pratique

"Notre système de test peut être étendu à un grand nombre de virus ou de bactéries différents, il est absolument flexible", souligne Vallooran. Parce qu'il est si simple à utiliser et que la détection de virus, par exemple, ne nécessite qu'un ensemble de conjugués anticorps-enzyme, le chercheur de l'ETH envisage son utilisation précisément dans les régions qui ne peuvent pas se permettre un équipement de laboratoire co?teux. "En dehors d'un réfrigérateur pour conserver les anticorps et les enzymes, les utilisateurs n'ont besoin que de l'appareil pour la détection de la lumière polarisée ainsi que de la substance porteuse de lipides. Ces deux éléments sont très bon marché", explique-t-il. Selon lui, la détection de maladies comme le sida ou Ebola est possible de manière fiable en moins d'une heure. "Notre technologie est très adaptée à l'utilisation sur le terrain et à la détection précoce des maladies".

Pour l'étude de cette technologie, Jijo Vallooran a re?u un prix. Bourse des pionniers de l'ETH. Les chercheurs ont également déposé une demande de brevet pour cette nouvelle technologie. "Nous voulons produire quelque chose de vraiment utile", explique Vallooran. Le potentiel de leur méthode de détection est très élevé, notamment en ce qui concerne les maladies flamboyantes comme la malaria ou Ebola, qui se propagent rapidement. C'est pourquoi les chercheurs de l'ETH travaillent actuellement d'arrache-pied pour obtenir davantage de fonds pour le développement de leur méthode, afin de pouvoir la mettre sur le marché le plus rapidement possible.

Vue agrandie : prototype de l'appareil de polarisation croisée
Prototype de l'appareil de polarisation croisée. (Image : ETH Zurich / Jijo Vallooran)

Référence bibliographique

Vallooran JJ, Handschin S, Pillai SM, Vetter BN, Beck H-P, Rusch S, Mezzenga R. Lipidic Cubic Phases as a Versatile Platform for the Rapid Detection of Biomarkers, Viruses, Bacteria and Parasites. Advanced Functional Materials, publié en ligne le 4 décembre 2015. DOI : page externe10.1002/adfm.201503428

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